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Satb2基因實時熒光定量聚合酶鏈反應標準品的制備及應用研究

更新時間:2013-03-03   點擊次數:6423次

【Author】 ZHANG Dan-fang,TANG Shi-jie,MAO Xiao-yan,XU Jin-hua,PENG Li-hong(Cleft Lip and Palate Treatment Center,The Second Affiliated Hospital,Shantou University Medical College,Shantou 515041,China)

【機構】 汕頭大學醫學院第二附屬醫院唇腭裂中心汕頭大學醫學院第二附屬醫院唇腭裂中心 廣東汕頭515041廣東汕頭515041

【摘要】 目的:制備用于Satb2基因實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)的標準品。方法:提取胚胎上頜突組織總RNA,行逆轉錄反應獲得*鏈的cDNA,再通過PCR回收獲得預期Satb2基因片段;通過T-A克隆將該片段插入pGMT質粒載體;大量提取質粒,定量后進行標準曲線的制作和實時熒光定量PCR。結果:重組質粒經PCR擴增及序列測定表明,pGMT/Satb2基因已成功克隆。結論:所構建的pGMT/Satb2基因實時熒光定量PCR檢測標準品應用Taqman熒光探針技術建立的標準曲線線性關系好,靈敏度和特異性高,準確可靠,此法可作為實時熒光定量PCR檢測Satb2基因的標準方法。

 
【文內圖片】
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